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1，如何用photoshop进行荧光双染的复合

两张图调为50%透明度，然后图层叠加，可以做到merg的效果。
也可以，不过有专门的图片处理软件昂，不但是photoshop还有其他软件的，专门用于分析这个的

如何用photoshop进行荧光双染的复合

2，高达HG的观星者的模型上色

个人认为，用荧光黄。上色的话用遮盖上色。 其实用黑底加红条纹也是很不错的~
我推崇最简单的办法 发光的黄色部分和绿色部分一律用荧光胶带裁切贴上 晚上发光很好看的 上色太麻烦了

高达HG的观星者的模型上色

3，急求间接免疫荧光双染实验步骤

FITC：操作步骤将纯化的IgG抗体对PH9～9.5碳酸盐缓冲液透析过夜，　　　　透析后抗体液移入小烧杯中　　　　　　　　　　　　　　↓　　　　称取适量IFTC，加入二甲亚砜(DMSO)(FITC～1mg/1ml DMSO)　　　　使终浓度为1mgFITC／1mlDMSO　　　　FITC／IgG比例:如IgG浓度为1mg／ml，FITC／IgG比例约为50μgFITC／mgIgG；　　　　如IgG为5～10mg／ml，则比例为25μgFITC／ml IgG　　　　在10ml小烧杯中先放入抗体　　　　　　　　　　　　　　↓　　　　按上述比例将FITC-DMSO溶液逐滴加入透析后的抗体溶液中　　　　　　　　　　 　↓　　　　将标记物用PBS加至2.5ml，磁力搅拌器室温下避光搅拌2h　　　　　　　　　　　 ↓　　　　用PD10柱(Sephadex G25柱)除去游离荧光素，先用25ml PBS淋洗G25柱　　　　　　　　　　　 ↓　　　　收集PBS洗脱第一个荧光素结合蛋白峰，测定F／P　　　　比值。第二个荧光素峰为游离荧光素　　　　计算:　　　　　　　　　2.87×A495　　　　F／P＝————————　　　　　　　　A280-0.35×A495　　　　合适的F／P值为2～4。　注意事项：1.　FITC保存于4℃暗处，使用前待试剂瓶升至室温时开盖称取，以避免潮解。2.　FITC-DMSO液要临用时配制。3.　碳酸盐缓冲液要新鲜配制。
这个是重叠的。perk一抗用的是兔，二抗是568抗兔抗原；gfap一抗是小鼠，二抗是488抗小鼠。血清都用了donkey。照片当中perk跟gfap出来的一模一样，所以我怀疑俩片子出来的是不是都是gfap一种蛋白呢？实在太一样了。不能确定perk有没有染出来。我也做过perk & ox-6 和perk & neun的荧光双染，样像都跟这些照片一样，两种蛋白拍的照片一模一样，所以我怀疑是perk的问题。

急求间接免疫荧光双染实验步骤

4，PI 染色操作步骤

去百度文库，查看完整内容>内容来自用户:唐韵茹sharonPI 染色操作步骤1、将单细胞悬液加入2ml圆底离心管中，离心，1500rpm , 5min，弃上清液。2、加入PBS 1ml离心洗涤1次，弃上清。3、加入2ml预冷的70%酒精，4℃固定30min，或是-20℃固定过夜。4、离心，弃上清液。5、用1×PBS 1ml洗涤1次，离心。6、加入RNase A (工作浓度20ug/ml)于500ul 1×PBS中，37℃孵育30min，离心。7、用1×PBS 1ml洗涤1次，离心。8、加入PI(工作浓度50ug/ml) 于500ul 1×PBS中，室温避光孵育30min。9、混匀，过300目筛网，置流式管中， 4℃冰箱保存，待测。GFP PI染色操作步骤1、将单细胞悬液加入2ml圆底离心管中，离心，1500rpm , 5min，弃上清液。2、加入PBS 1ml离心洗涤1次，弃上清。3、加入2ml预冷PFA，PFA的浓度根据细胞的特点进行调节，4℃固定30min。以下步骤同PI 染色操作步骤的（4-9）细胞表面直接免疫荧光染色操作步骤1、将单细胞悬液加入2ml圆底离心管中，离心，1500rpm，5min，弃上清液。2、以冷PBA 1ml，离心洗涤，弃上清液。3、加入用PBA稀释的荧光素标记的抗体200ul。用微量移液器轻轻吹打混匀，4℃或置冰上孵育30min-1h。4、离心弃上清液。5、加入冷PBS1ml,离心洗涤2次，以除去未结合的多余抗体成分。6、向细胞中加入冷PBS 500ul,吹打混匀，置流式管中，4℃避光保存，待测。5、 PBA适当稀释的荧光素标记的第二抗体200ul。吹打混匀，4℃或置冰上孵育30min，避光。
去百度文库，查看完整内容>内容来自用户:唐韵茹sharonPI 染色操作步骤1、将单细胞悬液加入2ml圆底离心管中，离心，1500rpm , 5min，弃上清液。2、加入PBS 1ml离心洗涤1次，弃上清。3、加入2ml预冷的70%酒精，4℃固定30min，或是-20℃固定过夜。4、离心，弃上清液。5、用1×PBS 1ml洗涤1次，离心。6、加入RNase A (工作浓度20ug/ml)于500ul 1×PBS中，37℃孵育30min，离心。7、用1×PBS 1ml洗涤1次，离心。8、加入PI(工作浓度50ug/ml) 于500ul 1×PBS中，室温避光孵育30min。9、混匀，过300目筛网，置流式管中， 4℃冰箱保存，待测。GFP PI染色操作步骤1、将单细胞悬液加入2ml圆底离心管中，离心，1500rpm , 5min，弃上清液。2、加入PBS 1ml离心洗涤1次，弃上清。3、加入2ml预冷PFA，PFA的浓度根据细胞的特点进行调节，4℃固定30min。以下步骤同PI 染色操作步骤的（4-9）细胞表面直接免疫荧光染色操作步骤1、将单细胞悬液加入2ml圆底离心管中，离心，1500rpm，5min，弃上清液。2、以冷PBA 1ml，离心洗涤，弃上清液。3、加入用PBA稀释的荧光素标记的抗体200ul。用微量移液器轻轻吹打混匀，4℃或置冰上孵育30min-1h。4、离心弃上清液。5、加入冷PBS1ml,离心洗涤2次，以除去未结合的多余抗体成分。6、向细胞中加入冷PBS 500ul,吹打混匀，置流式管中，4℃避光保存，待测。5、 PBA适当稀释的荧光素标记的第二抗体200ul。吹打混匀，4℃或置冰上孵育30min，避光。
1. 收集细胞2. 3ml　pbs洗涤1次。3. 离心去pbs，加入冰预冷的70%的乙醇固定，4℃，1—2小时。4. 离心弃去固定液，3mlpbs重悬5min。5. 400目的筛网过滤1次，500—1000r/min离心5min，弃去pbs。6. 用1ml　pi染液染色，4℃避光30min。7. 流式细胞仪检测：pi用氩离子激发荧光，激光光波波长为488nm，发射光波波长大于630nm，产生红色荧光分析pi荧光强度的直方图也可分析前散射光对侧散射光的散点图。8. 结果判断：在前散射光对侧散射光的散点图或地形图上，凋亡细胞与正常细胞相比，前散射光降低，而侧散射光可高可低，与细胞的类型有关；在分析pi荧光的直方图时，先用门技术排除成双或聚集的细胞以及发微弱荧光的细胞碎片，在pi荧光的直方图上，凋亡细胞在g1/g0期前出现一亚二倍体峰。如以g1/g0期所在位置的荧光强度为1.0，则一个典型的凋亡细胞样本其亚二倍体峰的荧光强度为0.45，可用鸡和鲑鱼的红细胞的pi荧光强度做参照标准，两者分别为0.35和0.7，可以确保在两者之间的不是细胞碎片而是完整的细胞。注意事项：细胞凋亡时，其dna可染性降低被认为是凋亡细胞的标志之一，但这种dna可染性降低也可能是因为dna含量的降低，或者是因为dna结构的改变使其与染料结合的能力发生改变所致。在分析结果时应该注意。

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